DB52T 1254-2017 生物安全柜检测技术规范 22页

ICS11.140C48DB52贵州省地方标准DB52/T1254—2017生物安全柜检测技术规范TechnicalPracticeforTestingBiosafetyCabinets2017-10-08发布2017-05-08实施贵州省质量技术监督局发布\n\nDB52/T1254—2017目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件....................................................................13术语和定义........................................................................14分级及类型和特点..................................................................25要求..............................................................................26检测方法..........................................................................37检测记录及报告...................................................................118检测规则.........................................................................11附录A（规范性附录）碘化钾法标准溶液配制方法（引用YY0569附录E碘化钾法）.....12附录B（资料性附录）生物安全柜检测原始记录表.......................................13附录C（资料性附录）生物安全柜检测报告表...........................................15I\n\n学兔兔www.bzfxw.comDB52/T1254—2017前言本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由贵州省计量测试院提出。本标准由贵州省标准化院归口。本标准起草单位：贵州省计量测试院、贵州省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：尤婕雯、肖小庭、倪雪飞、韩薇、夏诚俊、王定明。II\n\nDB52/T1254—2017生物安全柜检测技术规范1范围本标准规定了生物安全柜检测的术语和定义、分级及类型和特点、要求、检测方法、检测记录及报告、检测规则。本标准适用于Ⅰ级、Ⅱ级生物安全柜安装及维护后的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。YY0569II级生物安全柜3术语和定义YY0569界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1生物安全柜Biologicalsafetycabinet;BSC防止操作着和环境暴露于实验过程中产生的生物气溶胶而设置的负压过滤排风柜。3.2洁净度Cleanliness生物安全柜柜体内正常运行状态下含生物气溶胶的悬浮粒子数。3.3流入气流Inflowair从生物安全柜前窗操作口流入的气流。3.4下降气流Downflowair从生物安全柜上方经高效过滤器过滤的垂直向下流向工作区的气流。3.5下降气流Downflowair从生物安全柜上方经高效过滤器过滤的垂直向下流向工作区的气流。1\nDB52/T1254—20173.6照度illuminance生物安全柜无背景照明时操作台面的平均照度。3.7高效过滤器Highefficiencyparticulateair(HEPA)filter一种一次性的、具有延伸/褶皱介质的干燥型过滤器，高效空气粒子过滤器称高效过滤器。3.8紫外辐射强度UVradiationintensity在紫外线杀菌灯管表面正中线的特定距离处,测得的单位面积上的紫外线辐射强度。4分级及类型和特点4.1分级按气流及隔离屏障设计结构分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级生物安全柜。4.2类型和特点4.2.1Ⅰ级生物安全柜是有前窗操作口的安全柜，操作者可以通过前窗操作口在安全柜内进行操作。前窗操作口向内吸入的负压气流用以保护人员的安全；气流经高效过滤器过滤后排出保护环境不受污染。4.2.2Ⅱ级生物安全柜是有前窗操作口的安全柜，操作者可以通过前窗操作口在安全柜内进行操作。前窗操作口向内吸入的负压气流用以保护人员的安全；气流经高效过滤器过滤的垂直下降用以保护试验样品；气流经高效过滤器过滤后排出保护环境不受污染。4.2.3Ⅲ级生物安全柜是全密闭、不泄漏的安全柜，操作者通与生物安全柜连接的密闭手套实施操作，气流经高效过滤器过滤后垂直下降用以保护试验样品；气流经一道或者两道高效过滤器过滤后焚烧处理排出保护环境不受污染。5要求5.1外观及标识要求5.1.1应有完整的生物安全标识、名称、型号、出厂编号、制造厂名、制造日期、额定工作电源电压及频率等标识。5.1.2所有紧固件均应安装牢固，连接件应连接良好,不得松动；各调节旋钮转动灵活，无松动现象。按键和开关均能正常工作，电缆线的接插件应接触良好。不应有影响正常工作的损伤。各部件运转正常，无异常声响和振动。显示器显示应清晰、完整、正确。5.1.3生物安全柜按本标准规定的检测方法检测应符合表1的规定。2\nDB52/T1254—2017表1技术要求Ⅱ级项目Ⅰ级A1A2B1B2洁净度个/L≤—悬浮粒子数3.5流入气流速度m/s≥0.40.40.50.50.5下降气流流速（均匀下降气流安全—0.25～4柜）m/s下降气流流速（非均匀下降气流安—各区域下降的平均流速在其区域下降气流标称值±0.015之间全柜）m/s噪声dB(A)≤67照度lx≥650（每个测量点不小于430）2紫外辐射强度uW/m≥70高效过滤器完整性（漏过率）≤0.01%（可扫描检测）人员保护≤0.005%(不可扫描检测)6检测方法6.1外观及标识目测检查和运行观察检测外观。6.2洁净度6.2.1检测设备尘埃粒子计数器：粒径分辨率为0.5μm起始，流量为28.3L/min或者2.83L/min，经检定校准合格。6.2.2检测方法6.2.2.1生物安全柜置于正常工作条件下运行30min。6.2.2.2洁净度的测量边界距离内表面或前窗100mm。6.2.2.3操作步骤如下：a)粒子计数器的采样口置于工作台面向上200mm高度位置，每次的采样量不低于1L；b)按图1布置的每个测量点进行测量，记录并计算其平均值。图1测量点布置图3\nDB52/T1254—20176.3噪音6.3.1检测设备声级计：测量范围为(0～130)dB，精确度±1dB，分辨率为1dB，有“A”计权模式。6.3.2检测方法6.3.2.1将声级计设置为“A”计权模式。6.3.2.2打开生物安全柜的风机和照明灯，在生物安全柜前壁面中心水平向外300mm，工作台面上方380mm处测量噪声，检测图见图2。6.3.2.3关闭生物安全柜风机和照明灯，在相同的位置测量背景噪声。当背景噪声大于57dB时，实测值参照仪器操作手册提供的曲线或表进行修正，如果不适用按照噪声测量值修正表表2进行修正。表2照噪声测量值修正表测量噪声与背景噪声的差值（dB）从测量噪声中减去的数0～2降低背景噪声，重新测试334～526～101﹥100图2噪声检测图6.4照度6.4.1检测设备照度计：测量范围为（0～20000）lx，精确度为±8%。6.4.2检测方法6.4.2.1生物安全柜置于正常工作条件下。6.4.2.2在工作台面上，沿工作台面内侧壁中心连线设置照度测量点，测量点之间的距离不超过4\nDB52/T1254—2017300mm，与侧壁最小距离为150mm，检测图见图3。6.4.2.3用照度计检测各测量点，测量点不少于5点，记录各测量点数据并计算照度的算术平均值。图3照度检测图6.5流入气流6.5.1检测设备风速计：测量范围为(0～10)m/s，精确度为±0.15m/s。6.5.2检测方法6.5.2.1将工作窗开口高度开到指定的操作高度，运行安全柜，待生物安全柜处于稳定状态时。6.5.2.2将风速计在前窗操作开口平面的两排点测量气流流速，第一排在前窗操作开口上沿下约开启高度25%的位置，第二排在前窗操作开口上沿下约开启高度75%的位置，每排测量间距约100mm，距前窗操作口侧边接近但不小于100mm，检测图见图4。6.5.2.3测量点不少于7点，每点测试1min读取风速计数据，记录并计算出流入气流流速的平均值。图4流入气流检测图5\nDB52/T1254—20176.6下降气流6.6.1检测设备风速计：测量范围为(0～10)m/s，精确度为±0.15m/s。6.6.2检测方法6.6.2.1均匀下降气流安全柜：a)将工作窗开口高度开到指定的操作高度，运行安全柜，待生物安全柜处于稳定状态时；b)按下列方式在工作区上方高于前窗操作口上沿100mm的水平面上确定测量点位置，多点测量穿过该平面的下降气流流速,检测图见图4：1)测试区域边界与安全柜的内壁及前窗操作口的距离应为150mm；2)测量点等距分布，形成的正方形栅格不大于（150×150）mm，测试点最少应有3排，每排应有7个测量点；3)用夹具将风速计探针准确定位在各测量点进行测量。记录所有测试点的测量值并根据测量值计算出下降气流平均值。6.6.2.2非均匀下降气流安全柜:a)将工作窗开口高度开到指定的操作高度，运行安全柜，待生物安全柜处于稳定状态时；b)在工作区上方高于前窗操作口上沿100mm的水平面上多点测量穿过该平面各区域的气流流速，各区域的测试按照厂商使用说明书明确的各均匀下降气流区的范围进行测量，测量点等距分布，形成的正方形栅格不大于（150×150）mm，测试点最少应有3排，每排应有7个测量点；c)用夹具将风速计探针准确定位在各测量点进行测量。记录所有测试点的测量值并根据测量值计5算出各区域的下降气体平均值。图5下降气流检测图6.7人员保护6.7.1目的通过测试确定气溶胶是否保留在安全柜内、外部的污染物是否未进入安全柜的工作区域，以及安全柜中的气溶胶污染是否减到最小。确保操作人员的安全。6\nDB52/T1254—20176.7.2方法选择人员保护测试有碘化钾法和微生物法，仲裁法为微生物法，微生物法见YY0569标准中6.3、6.3.2。6.7.3碘化钾法6.7.3.1基本原理用碘化钾模拟安全柜内所生成的污染气体与逃逸气体，用气雾发生器在生物安全柜里特定位置输送碘化钾溶液产生雾状的碘化钾微小液滴，形成挑战气雾剂，利用向心工作原理采用空气采样器捕捉窗口逃逸的碘化钾气雾，采样结束后，取出采样器内的过滤薄膜，放到装有氯化钯溶液的培养皿中。过滤薄膜上的碘化钾液滴会展开，形成清晰可见的棕色小圆点。通过清点过滤薄膜上圆点的个数，来评价安全5柜的防护能力。（安全柜的操作者防护因子在1.5×10以上）6.7.3.2试剂6.7.3.2.1碘化钾：15g/L碘化钾乙醇溶液。6.7.3.2.2氯化钯：1.0g/L氯化钯的0.1mol/L盐酸溶液（配置见附录A）。6.7.3.3检测设备6.7.3.3.1生物安全柜质量检测仪：由气溶胶发生器、空气采样器、干扰圆筒组成。6.7.3.3.2气溶胶发生器：转速28000r/min，可以产生气溶胶。6.7.3.3.3空气采样器：流量100L/min，利用负压采集样品。6.7.3.3.4干扰圆筒：直径（60～65）mm，表面光滑。6.7.3.3.5过滤膜：孔径3μm。6.7.3.3.6皮氏培养皿：直径55mm。6.7.3.4检测方法6.7.3.4.1在远离被测试安全柜的地方摆放两只皮氏培养皿。一只培养皿内装入半皿氯化钯溶液，另一只内装入半皿蒸馏水，将盖子盖回到培养皿上。准备两张滤纸，用于干燥过滤膜。6.7.3.4.2将生物安全柜质量检测仪中的干扰圆筒放在安全柜工作区域的侧壁之间的中部，一端伸入到安全柜内部，紧贴安全柜后壁，干扰圆筒下沿距安全柜工作台面65mm～75mm。干扰圆筒的另一端伸出安全柜至少150mm，见图6）。6.7.3.4.3将四只空气采样器（X即左下，X1即左上，Y即右下，Y1即右上）放到安全柜前方中间部位，使采样器的空气进气口距安全柜前部开口平面150mm～160mm。两只采样器（X1即左上，Y1即右上）的进气口与干扰圆筒顶部水平，并在前部开口中线两侧各距中线150mm。另外两只采样器（X即左下、Y即右下）的进气口与前部开口平面之后100mm。调节发生器高度至涡流盘与前部开口顶沿水平，见图7）。6.7.3.4.4在每只空气采样器上安装一块过滤膜，依照厂家说明书调节每只采样器的压差至可产生100L/min的吸入气流流量。7\nDB52/T1254—2017图6人员保护实验侧面图图7人员保护实验正面图8\nDB52/T1254—20176.7.3.5检测步骤6.7.3.5.1启动安全柜，使其运行至正常操作状态。6.7.3.5.2使空气采样器吸气，启动涡流盘。等待15s后，使碘化钾进入涡流盘中部，允许20mL的碘化钾气溶胶化。气溶胶化结束15s后空气采样器停止吸气。等到抽气泵完全停下来后，移去过滤膜。6.7.3.5.3将一只采样器上取下的过滤膜放到盛有氯化钯溶液的皮氏培养皿内，对移去过滤膜的那只采样器进行标记。6.7.3.5.4过滤膜将在30s～50s内被氯化钯饱和，所有碘化钾微粒将变为棕色的可见斑点。将过滤膜放入蒸馏水内浸透3s～4s，然后将过滤膜放在清洁的滤纸上干燥。6.7.3.5.5其他空气采样器上取下来的过滤膜也做相同的处理，将盖子盖回培养皿。6.7.3.5.6用一只10倍的放大镜检查每个过滤膜，对过滤膜上的棕色斑点进行计数。以直径为0.1mm的斑点作为可记录的最小斑点，当斑点直径达到0.2mm时记录为2个斑点，以此类推。6.7.3.5.7每台生物安全柜重复检测3次，分别记录检测仪四个采集器（X即左下，X1即左上，Y即右下，Y1即右上）中滤膜上的棕色斑点数，取每个采集器平均值作为测试结果。比较四个采集器，测试结果最大的为最终结果。6.7.3.6算人员保护并表达测试结果计算释放的碘化钾粒子数N：7N1.310V....................................(1)式中：V————气溶胶发生器分散的碘化钾溶液的体积，单位为mL；73.1×10——由液滴尺寸、采样流量和涡流盘转速导出的一个常数。计算由每个过滤膜得到的开口防护因子A：4ANF/10n......................................(2)式中：F——采样流量，单位为L/min；N——过滤膜上的斑点数。6注1：在此情况下的条件是：V=20mL，F=100L/min，A=6.2×10/n；5注2：利用上面的式子和“注1”中给出的V和F的值，则如果A为1.0×10，相当于过滤膜上的斑点数为62；6注3：在计算A时，如果过滤膜上有一个斑点，则保护系数A等于6.2×10；如果过滤膜上没有斑点，则意味着保6护系数高于该值，可记为A＞6.2×10。6.7.4微生物法检测参照YY0569中6.3、6.3.2条款。6.8紫外线辐射6.8.1检测设备紫外照度计：测量波长:254±10nm，准确度为误差小于5%。9\nDB52/T1254—20176.8.2检测方法6.8.2.1生物安全柜置于正常工作条件下打开紫外灯运行30min。6.8.2.2在工作台面上，沿工作台面内侧壁中心连线设置照度测量点，测量点之间的距离不超过300mm，与侧壁最小距离为150mm（见图3）。6.8.2.3打开生物安全柜的紫外灯，用紫外照度计检测各测量点，测量点不少于5点，根据各测量点计算紫外辐射强度的算术平均值。6.9高校过滤器完整性6.9.1目的本试验测定安全柜过滤器安装结构（包括下降气流高效过滤器、排气高效过滤器、过滤器外罩和框架）的完整性。6.9.2试剂邻苯二甲酸二辛脂（DOP）或与之相当的液体即可以产生与DOP气溶胶颗粒尺寸分布相同气溶胶颗粒的液体，例如：聚α-烯烃（PAO）、癸二酸二（2-乙基己）酯、聚乙二醇以及药物级的轻矿物油。6.9.3检测仪器线性或对数刻度的，可以将过滤器上游气体中浓度为10ug/LDOP（或相当液体）多分散气溶胶微粒标示为100%，能检测0.001%同一气溶胶微粒。气溶胶发生器的压力计最大量程为0kPa～550kPa，分辨率和精确度为7kPa。6.9.4检测方法6.9.4.1运行安全柜的风机和灯，去掉过滤器的散流装置和保护盖（如果有）。将气溶胶发生器压力调至最小140kPa，使用DOP或与之相当的液体发生气溶胶。发生器喷嘴浸入液体的深度应不超过25mm。安放气溶胶发生器，将气溶胶导入安全柜，按厂家的说明产生均匀分布的高效过滤器上游气流。厂家未规定气溶胶的导入位置时，导入气溶胶的方式应确保其在安全柜的气流中均匀分布。6.9.4.2打开气溶胶光度计，按厂家使用说明进行调整。6.9.4.3对含有气溶胶的高效过滤器上游气流进行测试，证实该浓度气溶胶的光散射强度至少应等于由10ug/LDOP产生的光散射强度。注：如果是线性刻度的光度计（0～100分度），将读数调整为100；如果是对数刻度的光度计，将上游气流浓度的读数4调整在一个分度对应浓度的1×10以上（利用仪器校准曲线）。6.9.4.4光度计探头在过滤器下游距过滤器表面不超过25mm，以小于50mm/s的扫描速率移动，使探头扫描过滤器的整个下游一侧和每个组合过滤片的边缘，扫测路线应略微重叠。围绕整个过滤器外围、沿组合过滤片和框架的连接处以及围绕过滤器和其他部件之间的密封处仔细检查。6.9.4.5对于经管道排气的安全柜，不能进行排气过滤器的扫描检测，过滤器下游气流中气溶胶浓度的检测是在下游的管道上钻一直径大约10mm的孔，将带有硬管光度计探针插入孔中进行检测。10\nDB52/T1254—20177检测记录及报告7.1检测记录7.1.1检测应按附录A的记录表格，现场填写原始记录。7.1.2检测数据应按规定进行数据处理，修约至规定的位数。7.1.3检测结果应为修约后的数据。7.2检测报告7.2.1检测报告应客观公正、信息齐全、用词规范、字迹清晰、文字简练、结论明确。7.2.2检测报告内容至少包括：实验室名称和地址、送检单位的名称和地址、检测日期、检测人员、所用设备的溯源性、检测环境、检测数据、检测结果判定等。7.2.3检测数据应使用国家法定计量单位。8检测规则生物安全柜安装、移动后要进行检测，维护后或者更换高效过滤器后进行检测，建议检测时间不超过1年。11\nDB52/T1254—2017AA附录A（规范性附录）碘化钾法标准溶液配制方法（引用YY0569附录E碘化钾法）A.1碘化钾法标准溶液配制A.1.1设备A.1.1.1电子天平：最大称量不大于200g，分度值不大于0.1mg。A.1.1.2容量瓶：1000mL，A级。A.1.1.3移液管：10mL，A级。A.1.1.4烧杯：100mL，若干。A.1.2试剂A.1.2.1碘化钾[KI]：分析纯以上。A.1.2.2氯化钯[PdC1]：分析纯以上。A.1.2.3乙醇[C₂H₅OH]：分析纯以上。A.1.2.4盐酸[HCL]：分析纯以上。A.1.3配制方法A.1.3.115g/L碘化钾的乙醇溶液的配置用天子天平准确称量15.0g的碘化钾固体，放于烧杯中，轻轻倒入乙醇溶液，慢慢搅拌，待固体完全溶解后，转移至1000mL容量瓶内，用乙醇溶液稀释至刻度备用。A.1.3.20.1mol/L盐酸溶液的配制用10mL的移液管准确吸取9.0mL盐酸溶液，转移至1000mL容量瓶内，用蒸馏水稀释至刻度备用。A.1.3.31.0g/L氯化钯的0.1mol/L盐酸溶液的配置用电子天平准确称量1.00g的氧化钯固体，放于烧杯中，倒入已经配制好的0.1mol/L的盐酸溶液，搅拌至固体完全溶解，转移至1000mL容量瓶内，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度备用。A.1.4标准溶液的保存配制好的溶液在(5～30)℃的环境温度和避光条件下，保存3个月，如果发现溶液浑浊或伴有沉淀的现象出现时，应停止使用。12\nDB52/T1254—2017BB附录B（资料性附录）生物安全柜检测原始记录表表B.1生物安全柜检测原始记录表委托方名称仪器地点被检设备名称型号规格制造厂出厂编号技术依据温度：℃湿度：%RH检测设备名称型号规格编号准确度等级证书号有效期1、洁净度悬浮粒子数右前右后中点左前左后平均值2、噪声噪声测量值背景噪声测量值实测值3、光照度123456789012平均值4、流入气流流速(m/s)1234567第一排平均值1234567第二排5、下降气流流速(m/s)1234567第一排平均值1234567第二排1234567第三排6、紫外辐射强度（uW/m2）13\nDB52/T1254—2017表B.1生物安全柜检测原始记录表(续)7、高效过滤器完整性（%）可扫描检测过滤器漏过率不可扫描检测过滤器漏过率8、人员保护测量值采样点项目123平均值X污染点数Y污染点数X1污染点数Y1污染点数检测：核验：日期：14\nDB52/T1254—2017CC附录C（资料性附录）生物安全柜检测报告表表C.1生物安全柜检测报告表设备名称型号规格生产单位委托单位检测类别检测日期检测环境温度：湿度：其它：检测项目检测依据检测设备设备名称型号规格设备编号证书编号证书有效期检测结论备注序号检测项目标准要求检测结果单次结论备注_________________________________15\nDB52/T1254-2017